Hva er polyakrylamidgel?

Polyakrylamidgel er en løsning som vanligvis brukes i elektroforese, prosessen med å skille ut molekyler i forskjellige størrelser eller partikler ved å føre dem gjennom en gel og bruke elektrisk strøm.Det er forskjellige oppskrifter på polyakrylamidgel, men den inneholder vanligvis akrylamid, vann, en buffer, ammoniumpersulfat (APS) og tetrametyletylendiamin (Temed).Denne gelen fungerer som en matrise som skiller ut forbindelser basert på deres ladning og størrelse;Jo mer akrylamid i gelløsningen, jo bedre separasjon av mindre molekyler.Vanligvis brukes denne gelen til protein- og DNA -separasjon.

I elektroforese får et elektrisk felt ladede partikler til å bevege seg gjennom en gel, som fungerer som en sil for å føre til at partiklene i forskjellige størrelser skiller seg.Gelen vil absorbere all varme produsert fra den elektriske strømmen.Polyakrylamidgel brukes ofte i denne prosedyren, men agarose, et annet kjemikalie som skaper en lignende gel, kan også brukes.

geler kan være laget av varierende konsentrasjon, med mengden akrylamid fra omtrent 6% til 15%.Når du blander opp gelen, er akrylamid upolymerisert, noe som betyr at det forblir som enkeltmolekyler.Tilsetning av andre kjemikalier som fremmer binding, for eksempel Temed, får molekylene til å koble sammen danner lange kjeder og mdash;Poly -delen av polyakrylamid.

Den viktigste fordelen med polyakrylamidgel er at antallet koblingsbindinger og hardhet kan kontrolleres basert på den opprinnelige mengden akrylamid og temmet tilsatt.En hovedfaktor i akrylamidkonsentrasjon er størrelsen på molekylet som analyseres.Jo mindre forbindelsene som blir separert, jo mer er akrylamid nødvendig;Svært små partikler skilles ved bruk av den høyeste konsentrasjonen, 15 prosent.

akrylamid fungerer ved å kontrollere mengden friksjon i gelen;Hardheten til gelen bestemmer mengden av friksjon.Forbindelser som er store vil bevege seg saktere gjennom gelen, da det naturlig er mer friksjon eller motstand på grunn av deres størrelse.Mindre forbindelser beveger seg raskere, da det er mindre friksjon.For å forhindre at små forbindelser beveger seg av gelen, tilsettes mer akrylamid for å skape mer friksjon.

DNA -polyakrylamidgel brukes til å skille DNA -tråder med forskjellig lengde.DNA -deler vil skille seg med så lite som ett nukleotid, forbindelsene som utgjør hver streng.For å vite hvilke brikker som refererer til de spesifikke størrelsene, kjøres en standard som inneholder fragmenter av en kjent størrelse ofte sammen med prøver.DNA -stykkene blir deretter sammenlignet med standarden, og størrelsen på strengen bestemmes.

En lignende prosedyre brukes for å bestemme størrelsen på proteiner, oftest de i blod.Blod inneholder to hovedtyper av protein: globulin, et protein med stor størrelse og serumalbumin, et veldig lite, negativt ladet protein.Separasjon ved bruk av polyakrylamidgel brukes til å bestemme mengden av hver type.